Как свидетельствует предание, постриг Иоанна во имя многострадального Иова совершил архимандрит Герман, настоятель Старицкой Успенской обители, у которого Иов и был в послушании и полной покорности.

Уже о молодом Иове монахи-современники говорили, что не обретался человек, "подобный ему ни гласом, ни чином, ни похождением, ни вопросом, ни ответом". Он в совершенстве знал Священное Писание, а Евангелие, Апостол и Псалтирь помнил наизусть.

Впоследствии же пространные молитвы литургии Василия Великого и вечерни Пятидесятницы мог совершать по памяти. Чтение его было умилительно и "доброгласно".

Высокая образованность и безукоризненные манеры обращения - "чин" и "похождение" монаха Иова привлекли внимание церковной иерархии, и вскоре Иов был поставлен настоятелем Успенского монастыря. С первых же дней Иов начинает заботиться о благоукрашении обители и сооружает монастырскую трапезную с шатровой Введенской церковью.

В 1571 году архимандрит Иов переводится в Москву, где определяется настоятелем сначала Симонова Успенского, а затем — Новоспасского монастыря.

Архимандрита Иова отличали терпимость ко всем и душевная сдержанность, благожелательный совет и тайная слезная молитва за свою паству. Такой образ его деяний сохранится до самой кончины блаженного старца-Патриарха.

По своему чину Новоспасский архимандрит должен был участвовать в церковных соборах, поэтому его имя можно встретить в соборных грамотах начиная с 70-х годов XVI века. Так, он участвовал в соборе "о нестяжателях" в 1580 году, когда рассматривался вопрос о монастырских вотчинах. Участие архимандрита Иова в этом соборе было не случайным и не преходящим эпизодом его жития. Впоследствии, будучи Патриархом, он не стяжал себе ничего, кроме святительских одежд, а все патриаршие доходы направлял на устройство церквей, монастырей и на благосостояние крестьянских сел.

Пред своей кончиной Патриарх-нищелюбец писал, что он сооружал церкви и ставил патриаршие дворы ради нужд церковных, всем нуждающимся крестьянам и погорельцам всегда помогал, а оттого, что приобрел в свою келью, никто не пострадал. Когда же он скончался, то в его келье было обнаружено всего лишь 15 рублей, несколько икон и немного домашнего имущества.

Архимандрит Новоспасского монастыря вскоре стал епископом Коломенским. Пробыв на этой кафедре пять лет, Иов был поставлен на Ростовскую архиепископию, а некоторое время спустя — 11 декабря 1687 года — на Московскую митрополию.

Для архиепископа Иова это поставление было исполнением послушания царской воле и благословения освященного собора: в прощальной грамоте он говорит, что был "понужден от него (государя) аз смиренный на великую митрополию".

На всем пути церковного служения смиренный Иов был водим не собственной волей, но вопреки ней. Промысел Божий вел Иова тесным путем между боярскими смутами и бедственными воздыханиями русского народа. Святитель Иов течение жизни совершал так, как требует святое Евангелие: возлюбил кротость, милосердие и плач о грехах.

Смиренный митрополит приобрел государственный ум, содействуя царям мудрым словом и советом.

В то время, когда Русь возвеличилась как царство, Руси дан был кротчайший и смиреннейший из ее первосвятителей от Бога, воспринявший патриарший чин и звание.

С падением Константинополя и воцарением великого князя Иоанна IV Москва все более становилась центром Вселенского Православия. Идея "Москва — третий Рим" была реальностью, с которой считался весь православный мир. Многие считали, что "православнейшему царю" должен содействовать высший чин духовной иерархии — Патриарх, а Церковь царствующего града должна быть патриархатом. Все шло к тому, что возведение Московской митрополии в патриархат воспринималось как естественный ход событий. Кроме того, мысль об учреждении патриархата укреплялась тем, что московский царь, будучи охранителем Православия внутри страны, как государь-могущественной державы, мог оказывать материальную и политическую поддержку восточным Православным Церквам.